Diseño y construcción de vectores de expresión para estudio de microRNAs con implicaciones en mejoramiento genético de semillas en Arabidopsis thaliana
| Tipo: | Tesis |
| Autor: | Dr. Noé Valentín Durán Figueroa y Dr. Jesús Agustín Badillo Corona; M. en C. Andrea Tovar Aguilar |
| Fecha: | 2013-06-24 |
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL. Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología (UPIBI). La apomixis es un método de reproducción asexual a través de semillas, en la actualidad existe un gran interés de lograr inducir este tipo de reproducción en plantas de interés agrícola. En 2010 se publicó la existencia de una proteína llamada ARGONAUTA9 en la planta modelo Arabidopsis thaliana, el estudio demostró que la perdida de función del gen AGO9 resulta en un fenotipo similar al de plantas apomícticas,lo cual sugirió que las plantas de reproducción sexual pueden reproducirse por esta vía al perder dicho gen. En general, las proteínas ARGONAUTA interactúan con moléculas de RNA no codificante (sRNAs) en distintos procesos de silenciamiento genético. Recientemente, sRNAs del tipo microRNAs han sido asociados a la formación de gametos, semillas y embriones, principalmente microRNAs interactores de la proteína AGO9 se han sugerido participan en la regulación de la gametogénesis femenina. En este trabajo se realizó la construcción de vectores de expresión a los cuales se les insertó la Región Genómica Más Probable del promotor (RGMP) del miRNA fusionada al gen reportero GUS, lo que permitió observar la actividad del promotor de cada gen miR y deducir la expresión espacial y temporal del miRNA interactor de AGO9. Para esto se clonaron 13 RGMP en el vector pBS y a partir de esas clonaciones de logró hacer la construcción en el vector pBI de 5 RGMP::GUS. Se transformaron plantas silvestres (Wt) de Arabidopsis por el método de inmersión floral por infección de Agrobacterium tumefaciens con las construcciones del miR858 y miR157, la tinción GUS mostró que el miR858 se expresa en distintos tejidos de Arabidopsis thaliana como hoja, silicuas y pétalos; mientras tanto el miR858 se observó su expresión en anteras, estos resultados fueron comprobados por PCR con oligos específicos para amplificar la RGMP y el gen uidA. En conclusión, se generaron plantas transgénicas que contienen la RGMP de dos miRNAs fusionada al gen GUS que permiten evaluar la expresión en espacio (tejido) y tiempo (estado de desarrollo) específicos. Enero 2013. |
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